laboratorio analisis de agua

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I. INTRODUCCIÓN:

El método de recuento en placa, permite la determinación de los microorganismos viables presentes en una muestra, siempre que se utilice un medio de cultivo adecuado y que las condiciones de incubación sean correctas (nutrientes, atmósferas y temperatura).Por lo tanto, este método puede aplicarse al recuento de grupos distintos demicroorganismos. Así tenemos: microorganismos psicrófilos, mesófilos, termófilos, mohos y levaduras, enterocococos, estafilocococos, enterobacterias, etc..
Las técnicas de siembra más comúnmente usadas para el recuento de microorganismos viables, son el recuento estándar en placa por siembra por incorporación y el recuento en placa de siembra por extensión en superficie. Es necesario indicar, que ninguna deestas formas de siembra es capaz de poner de manifiesto todos los microorganismos viables presentes en una muestra, debido a la variedad de necesidades nutritivas y condiciones físicas exigidas por los diferentes tipos de microorganismos, por lo cual el recuento en placa proporciona sólo una aproximación de la población total presente en la muestra.
Como las colonias pueden originarse tanto de una célula como de un grupo de células para expresar el resultado se utiliza el término:“unidades formadoras de colonias” (u.f.c). Además, a fin de que todas las células que queden en una placa tengan una adecuada disponibilidad de nutrientes, y que los errores del método sean menores, se establece que las condiciones óptimas de conteo se dan cuando desarrollan entre 30 y300 colonias por placa. Cuando esto no se cumple se considera el valor obtenido como una estimación del recuento.
Para estimar los materiales sólidos que son solubles en el agua o que forman suspensiones finas en este medio (como por ejemplo harina, leche en polvo, azúcar), se suspende o se disuelve por agitación en un diluyente estéril una cantidad dada demuestra. Ciertos materiales sólidos como el queso y la carne, deben se triturados hastapequeñas partículas en diluyente estéril. Entre los diluyentes más comúnmente empleados se encuentran la solución Ringer diluida a un cuarto, el diluyente agua de peptona y la Solución Salina Fisiológica Peptonada (S.S.F.P).

II. OBJETIVOS:

a.Adiestrar al estudiante con el método

b.Determinar el número de microorganismos viables presentes en una
muestra de alimento.

III. MATERIAL:

1. BIOLÓGICO:

- Muestra: Agua

2. DE LABORATORIO:
- Placas de petri estériles.
- pipetas.
- mechero
- Tubos de ensayo.

3. MEDIOS DE CULTIVO:
- Agar cuenta gérmenes (PCA)
- Solución Salina Fisiológica Peptonada (SSFP)

4. EQUIPOS:

- Contador Quebeck
- Incubadora regulada a 35– 37ºC.

IV. PROCEDIMIENTO:

La muestra debe llegar al laboratorio convenientemente identificada cumpliendo los
requisitos de muestreo.

4.1 SIMBRA POR INCORPORACIÓN:

1. Desinfectar al lugar de trabajo con alcohol Yodado.
2. identificar la muestra con los siguientes datos: Nombre y/o número dellote, dilución, volumen sembrado, técnica de siembra, fecha, operador, etc.
3. Segúnla carga microbiana esperada elegir las diluciones a sembrar. Realizar no menos de tres diluciones consecutivas: 1:10, 1:10, 1:1000.Cada vez que se prepara una dilución cargar y descargar la pipeta cuandomenos tres veces.
4. depositar 1ml de cada dilución en placas estériles, vacías, por
duplicado.
5. Adicionar a cada placa 15 a 20 mL del medio de cultivo a emplear (porejemplo PCA, para bacterias aerobias mesófilas viables, u otro medio decultivo de acuerdo al microorganismos que se desee contar), previamentelicuado y enfriado a 45ºC.
6. Mezclar cuidadosamente el medio y el inoculo mediante unacombinación de movimiento giratorios y de vaivén, cobre la superficie dela mesa de trabajo. Deben tomarse precauciones para que durante estosmovimientos, el agar no toque la tapa de la placa de Petri. Dejar solidificar.
7. Después de solidificado el agar, incubar las placas a 37ºC durante 24 a 48 horas.
8. Para el recuento, escoger las placas en las que hadesarrollado entre 30
a 300 u.f.c.

4.2 SIEMBRA POR EXTENSIÓN EN SUPERFICIE:

Si la siembra es en superficie, se deposita en la superficie de las placas que ya contieneel medio de cultivo solidificado, 0,1 mL de cada dilución. Se siembra por duplicadopara cada dilución. Luego de colocada la muestra, se procede a extenderla sobre lasuperficie de las placas con un asa adecuada. Incubar las placas a 37°C por 24 a 48 horas, luego hacer la lectura e informar el resultado.
La técnica de siembra por extensión en superficie es más adecuada para recuentos depsicrótrofos y psicrófilos, o muestras en las que se supone hay patógenos para que los microbios no se inactiven con la temperatura del agar licuado.

V. ESQUEMA DE TRABAJO.

1er Paso:

Se procederá a desinfectar las manos de quien va a realizar el experimento con alcohol diodado y a desinfectar el ambiente con un mechero encendido por donde se pasarán de manera cuidadosa los instrumentos a utilizar como lo demuestra la gráfica siguiente:

2do Paso:

Acá se procede a tomar 1 ml de muestra con la pipeta y colocar en 1er lugar uno de los dos tubos que contienen la solución salina fisiológica, para obtener la 1a solución 10-1 después se tomará 1 ml para ser agregado en 2do lugar al segundo tubo para obtener la segunda solución 10-2

3er Paso:

Acá se tomó 1 ml de cada solución y se colocó en una placa petrix que a su vez contenia 12 a 15 ml de agar.En este caso se graficó commo si se hubiera realizado en dos placas pero en realidad solo se realizó una.